ABSTRACT
In order to optimize an in vitro regeneration system for colombian rice varieties, the amount of plant regulators used for each step of the process was modified, together with other factors such as seed position and time of exposition to plant regulators. Modification of 2,4-D concentration during callus induction and coculture has a negative effect on regeneration potential. However, it is possible to increase the amount of produced calli by modifying the position in which the seed is placed on the culture medium. Moreover, a longer callus induction time decreased the regeneration percentage. During the regeneration step, for FEDEARROZ 2000 variety, a combination of 1,0 mg/l g/l mg/l of naftalenacetic acid + 4,0 mg/l g/l mg/l of kinetin increases the regeneration percentage, without increasing the amount of abnormal shoots and without decreasing their size. For FEDEARROZ 50 variety, the best combination of plant regulators is 0,5 mg/l g/l mg/l of naftalenacetic acid + 2,0 mg/l g/l mg/l of kinetin.
Para optimizar un sistema de regeneración in vitro de variedades colombianas de arroz, se modificaron las concentraciones de los reguladores utilizados a lo largo de cada etapa del proceso de cultivo, junto con otros factores como la posición de siembra de la semilla y el tiempo de exposición a los reguladores. Se encontró que la modificación de la concentración de 2,4-D para las etapas de inducción de callo y cocultivo repercute de forma negativa en la regeneración. Por otra parte, es posible incrementar el porcentaje de formación de callo cambiando la posición de siembra de la semilla. Adicionalmente, un mayor tiempo de formación de callo provocó una disminución del porcentaje de regeneración. En la etapa de regeneración, para la variedad FEDEARROZ 2000 se encontró que una combinación de 1,0 mg/l g/l mg/l de ácido naftalenacético + 4,0 mg/l g/l mg/l de kinetina aumenta el porcentaje de regeneración, sin incrementar la cantidad de brotes anormales y sin disminuir de forma considerable el tamaño de los brotes. Para la variedad FEDEARROZ 50, la mejor combinación de reguladores durante la regeneración es de 0,5 mg/l g/l mg/l de ácido natfalenacético + 2,0 mg/l g/l mg/l de kinetina.
ABSTRACT
Uno de los elementos imprescindibles en la ingeniería genética de plantas es un sistema de selección eficiente. El propósito de este trabajo fue evaluar la sensibilidad al marcador de selección higromicina B, de callos embriogénicos obtenidos a partir del escutelo de semilla de tres variedades colombianas de arroz (FEDEARROZ 2000, FEDEARROZ 50 y FEDEARROZ 369). Además, se validó la respuesta de estas variedades al protocolo de regeneración empleado. Se probaron cuatro concentraciones del antibiótico (25 mg/L, 50 mg/L, 75 mg/L y 100 mg/L) más un control sin higromicina B. Los resultados obtenidos mostraron que una concentración de 50 mg/L de antibiótico en el medio de regeneración es adecuada para la selección. Con esta concentración se impide la formación de brotes, aunque los callos no mueren completamente. Por otra parte, se estableció que el protocolo de regeneración utilizado es de baja eficiencia y, por consiguiente, es necesario optimizarlo para poder usarlo en procesos de ingeniería genética de cultivares colombianos de arroz.
An efficient selection system is one of the most important elements of plant genetic engineering. The purpose of this study was to evaluate the sensitivity of scutellum-derived embriogenic calli obtained from three colombian rice varieties (FEDEARROZ 2000, FEDEARROZ 50 and FEDEARROZ 369), to the selection marker hygromycin B. Aditionally, the response of these varieties to the regeneration protocol was measured. Four antibiotic concentrations were tested (25 mg/L, 50 mg/L, 75 mg/L and 100 mg/L) plus one control without hygromycin B. The results show that 50 mg/L of antibiotic in the regeneration medium is adequate for selection. This concentration prevents the formation of shoots, though the calli do not die. It was also established that the regeneration protocol is a low-efficiency system and it needs to be improved, in order to use it for colombian rice genetic engineering.